Y1HGold酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
簡(jiǎn)要描述：
Y1HGold酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是Clontech GAL4-AbA酵母單雜交系統(tǒng)用的菌株，MATα型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行文庫(kù)篩選。Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，分別為pAbAi和pGADT7。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-20
打印當(dāng)前頁(yè)Y1HGold Chemically Competent Cell
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
溫馨提示
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產(chǎn)品關(guān)鍵詞：
GAL4-AbA酵母單雜交系統(tǒng)；Y1HGold；pAbAi；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal ；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；
產(chǎn)品訂購(gòu)：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2362-1000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 290 |
MF2362-5000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1320 |
產(chǎn)品組分：
組分編號(hào) | 組分名稱 | 保存 | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2362-1000UL | MF2362-5000UL | |||
MF2362-A | Y1HGold Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2362-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2362-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2362-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
產(chǎn)品描述
酵母單雜交是在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)，不同于雙雜交用來(lái)研究蛋白-蛋白間的相互作用，單雜交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。
Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母單雜交系統(tǒng)用的菌株，MATα型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行文庫(kù)篩選。
Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，分別為pAbAi和pGADT7。前者篩選標(biāo)志為Ura，用于表達(dá)pBait-AbAi構(gòu)建子（通過(guò)將bait-DNA 單拷貝或串聯(lián)重復(fù)序列克隆到pAbAi載體所得）；后者篩選標(biāo)志為Leu，用于表達(dá)GAL4 AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)的工作原理在于：基因組整合有pBait-AbAi的酵母報(bào)告菌株，當(dāng)誘捕蛋白（prey）結(jié)合到誘餌序列（bait-DNA），GAL4 AD會(huì)激活AUR1-C報(bào)告基因的表達(dá)，這一表達(dá)使得細(xì)胞能夠在含篩選抗生素金擔(dān)子素（Aureobasidin A，AbA）的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。與傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比，AUR1-C（AbAr）在很低濃度（100-200 ng/ml）下即可以有效殺死非抗性克隆，大大降低背景克隆生長(zhǎng)。這一優(yōu)勢(shì)也可降低酵母單雜交假陽(yáng)性發(fā)生的概率。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y1HGold酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。
基因型
MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
使用方法
- 取100 µl冰上融化的Y1HGold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重復(fù)一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
- 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
- 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH2O重懸沉淀，離心30s棄上清。
- 用50 µl ddH2O重懸，涂板，放入恒溫培養(yǎng)箱29℃培養(yǎng)48-96 h。
相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
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MF2356-1000UL | AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
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MF2364-1000UL | Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
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MF2360-1000UL | NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MS6303-350G | YPDA Agar Medium YPDA瓊脂培養(yǎng)基 | 350g |
MS6304-250G | YPDA Medium YPDA液體培養(yǎng)基 | 250g |
MS6311-467G | Minimal SD Agar Base SD瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 467g |
MS6312-267G | Minimal SD Base SD基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 267g |
MS6317-10G | DO Supplement -Leu | 10g |
MS6320-10G | DO Supplement -His/-Leu | 10g |
MS6334-10G | DO Supplement -Leu/-Met/-Trp | 10g |
MS6342-10G | DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp | 10g |
MS0002-1ML | Aureobasidin A (AbA) 金擔(dān)子素A（1 mg/ml） | 1ml |
MF2501-200T | Yeast Transformation Kit 酵母轉(zhuǎn)化試劑盒 | 200T |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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Y1HGold酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
Y1HGold酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞