Fluo-8, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純

——zui亮的Ca²⁺綠色熒光探針

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Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純；Fluo-2, AM；Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester; 可見光激發(fā)波長Ca²⁺熒光探針；Fluo-3； Fluo-4；高通量篩選 HTS Screen Assay；

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity），是目前zui亮的可見光激發(fā)波長Ca²⁺熒光探針，其熒光強度比Fluo-4強兩倍，比Fluo-3強四倍。Fluo-8具中等程度的Ca²⁺親和力，幾乎接近Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），使用上幾乎同Fluo-3和Fluo-4。Fluo-8不僅維持Fluo-3，Fluo-4便捷的光譜檢測特性，與Ca²⁺結(jié)合后的zui大激發(fā)波長為490nm，zui大發(fā)射波長為514nm。而且具有改善的細(xì)胞載入和Ca²⁺響應(yīng)能力。Fluo-8加載具較弱的溫度依賴性，在室溫或37℃孵育皆染色良好，不像Fluo-3，Fluo-4嚴(yán)格要求在37℃孵育，此特征使其更適用于HTS高通量篩選實驗。Fluo-8應(yīng)用廣泛，與許多細(xì)胞系和靶向樣本兼容，不會受配體或靶標(biāo)本身信號干擾。Fluo-8可通過激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡等來檢測胞內(nèi)鈣離子水平的變化。Fluo-8, AM是Fluo-8的一種乙酰甲酯衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，只需簡單培養(yǎng)，即可輕易進入細(xì)胞。一旦進入細(xì)胞內(nèi)，即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-8，從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。

可見光激發(fā)Ca²⁺熒光探針的優(yōu)勢：

與紫外光激發(fā)的熒光探針相比，如Fura-2和Indo-1，可見光激發(fā)Ca²⁺探針具有以下特點：

1）適用于大多數(shù)的激光共聚焦測鈣系統(tǒng)，包括共聚焦激發(fā)掃描顯微鏡以及流式細(xì)胞儀等。

2） 具有更強的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca²⁺變化，從而降低對活細(xì)胞的光毒性。

3）Ca²⁺依賴性熒光強度增強，對Ca²⁺變化水平檢測敏感度更高。

4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。

5）兼容光激活探針以及UV-激發(fā)試劑，因此更方便于多參數(shù)檢測。

6）無光譜偏移。

Fluo-8, AM相比較于Fluo-3，Fluo-4的優(yōu)勢：

1）目前zui亮的可見光激發(fā)波長Ca²⁺熒光探針，熒光強度是Fluo-4的兩倍，Fluo-3的四倍；

2）熒光探針加載更靈活快速，室溫或37℃孵育染色效果好，不像Fluo-3、Fluo-4嚴(yán)格要求在37℃孵育；

3） 維持Fluo-3、Fluo-4的檢測光譜特性，與Ca²⁺結(jié)合后的zui大激發(fā)波長為490nm，zui大發(fā)射波長為514nm。4）50μg小包裝供應(yīng)，使用方便，且能很好保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

Fluo-8, AM的應(yīng)用圖片：

Fig. 1, U2OS cells were seeded overnight at 40,000 cells per 100 µL per well in a 96-well black wall/clear bottom costar plate. The growth medium was removed, and the cells were incubated with 100 µl of 4 µM Fluo-4, AM or Fluo-8, AM in HHBS at 37 °C, 5% CO₂incubator for 1 hour. The cells were washed twice with 200 µl HHBS, then imaged with a fluorescence microscope using FITC channel.

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Fluo-8, AM鈣離子熒光探針，超級純

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